附件：ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊技術審查指導原則（2017年第209號）.doc

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）
注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調整。

一、范圍

ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）是指使用凝膠、玻璃微珠等材料進行填充微柱，以免疫血液學、顆粒過篩和離心技術結合原理，進行人ABO血型的正定型鑒定及RhD抗原的檢測。

本指導原則適用于ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）以及包含ABO、RhD血型抗原檢測用途的柱凝集法的血型檢測卡，但不適用于血源篩查用血型正定型試劑。

本指導原則僅包括對ABO、RhD血型抗原檢測卡（柱凝集法）注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2014年第44號）（以下簡稱2014年第44號公告）的相關要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從抗體生物學來源、抗體效價、特異性、靈敏度、有效期等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠或其他填充物、緩沖液等）的選擇、制備及其質量標準的研究資料。

1.抗體的選擇及質量標準。應明確寫明抗體的供應來源、生物學來源或克隆號，抗D抗體應明確抗體屬性，是IgM型或IgG型或兩者均含有。

1.1抗體效價

將抗A、抗B抗體進行倍比稀釋，應用試管法分別與A1型、A2型紅細胞試劑和B型紅細胞試劑反應，考察抗體效價。境內(nèi)產(chǎn)品應與國家標準品比對，抗體效價不得低于國家標準品。進口產(chǎn)品依據(jù)原產(chǎn)國適用標準或標準品提交效價研究資料。

將抗D抗體進行倍比稀釋，應用試管法與RhD陽性紅細胞試劑反應，考察抗體效價。

1.2特異性

抗A抗體應與A1型、A2型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發(fā)生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B抗體應與B型試劑紅細胞及A1B、A2B型紅細胞發(fā)生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D抗體應與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

1.3抗體親和力

抗A、抗B抗體親和力應該滿足現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》要求。將抗A、抗B血型試劑分別與10%紅細胞懸液于瓷板或玻片上混勻，抗A血型試劑與A1、A2、A2B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應分別不長于15秒、30秒、45秒；抗B血型試劑與B血型紅細胞出現(xiàn)凝集的時間應不長于15秒，且在3分鐘內(nèi)凝集塊應達到1mm2以上。

抗D親和力可參考相應的行業(yè)標準。將約50μL抗體置潔凈瓷板或玻片上，加等體積10%RhD陽性O型紅細胞懸液（3人份混合），立即混勻，凝集時間應不大于15s，3min內(nèi)凝集塊應不小于1mm2。

1.4應提供不同批次抗體的驗證資料。

1.5如為兩株抗體混合，應提交驗證資料說明混合比例。

2.填充物的選擇

說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液

應說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件（如介質、時間、溫度等）的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的要求。

4.主要反應體系的研究資料、每一步反應體系的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。

反應體系的設置應符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認標準操作規(guī)范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、溫度、時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數(shù)和時間的方式設置離心條件。反應體系設置與《全國臨床檢驗操作規(guī)程》要求不一致的產(chǎn)品應提供充分的驗證資料證明反應體系的有效性。

（四）分析性能評估資料

申請人應提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)或國際有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。

產(chǎn)品性能研究所采用的儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內(nèi)或境外已批準上市的產(chǎn)品，如紅細胞試劑、抗人球蛋白試劑、離心機等。

分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法。所有試驗方法應符合產(chǎn)品說明書的具體操作要求。

分析性能研究應采用至少三批產(chǎn)品進行。如檢測卡同時適用于手工法及全自動血型分析儀，應分別進行性能驗證并對兩者性能進行比較。

建議著重對以下分析性能進行研究：

1.外觀

檢測卡應標識清晰，不同抗體對應不同顏色，封口應嚴密且能夠整條撕脫，檢測卡內(nèi)填充物均勻，無干枯現(xiàn)象，液面高度一致，無明顯傾斜，離心后應無氣泡。

2.特異性

抗A柱應與A1型、A2型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發(fā)生陽性反應，與B型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗B柱應與B型試劑紅細胞和A1B、A2B型紅細胞發(fā)生陽性反應，與A1型、A2型、O型試劑紅細胞為陰性反應；

抗D柱應與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生陽性反應，與RhD陰性試劑紅細胞為陰性反應。

質控柱（Ctl柱）（如有）均呈陰性反應。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

3.靈敏度

3.1凝集強度要求

抗A柱與A1型試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應為4+，與A2型及A2B試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于2+；與A1B試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于3+；

抗B柱與B型試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應為4+，與AB型（A1B或A2B）試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應不小于3+；

抗D柱與RhD陽性試劑紅細胞發(fā)生凝集反應時，反應強度應為4+。

3.2與試管法的比對試驗

采用同樣的A1型、A2型、AB型、B型、RhD陽性試劑紅細胞，將試劑卡檢測結果與試劑卡使用的抗體采用試管法的檢測結果進行比較，依據(jù)各自的結果判定方法進行凝集強度的判讀，試劑卡凝集強度不得低于試管法。

所有陽性反應不應有雙群現(xiàn)象等混合反應，所有陰性反應不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

4.重復性

采用A1型、A2型、B型、AB型、O型試劑紅細胞分別對抗A柱和抗B柱進行重復性試驗，采用RhD陽性和陰性試劑紅細胞對抗D柱進行重復性試驗，使用上述所有試劑紅細胞對Ctl柱（如有）進行重復性試驗。

批內(nèi)重復性采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數(shù)不少于10次，比較同一批次檢測卡不同次檢測之間的檢測結果。

日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復檢測上述試劑紅細胞，重復天數(shù)不少于10天，比較同一批次檢測卡不同天檢測之間的檢測結果。

批間重復性采用至少三批檢測卡對上述試劑紅細胞進行重復檢測，比較不同批次間的檢測結果。

批內(nèi)、日間、批間重復性檢測結果應分別對應一致，對同一試劑紅細胞的檢測結果凝集強度差異不超過1+。陰性結果不應有凝集、溶血等不易分辨現(xiàn)象。

手工法檢測還應考察不同操作人員之間的重復性。建議由至少3名不同操作人員，采用同一批次檢測卡重復檢測上述試劑紅細胞，重復次數(shù)不少于10次，比較不同操作人員檢測之間的檢測結果的重復性。

5.臨床樣本驗證

收集各ABO血型臨床樣本，包括RhD陰性樣本，采用試劑卡進行檢測，將血型鑒定和凝集強度結果與已上市試劑結果進行比較。臨床樣本的收集應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等來源。

6.收集臨床弱凝集紅細胞樣本，驗證抗A、抗B和抗D陽性小于3+及各種凝集強度的情況，并提供各種凝集強度的圖片。

7.收集各種血型的直接抗人球蛋白試驗陽性紅細胞進行檢測驗證，并提供直接抗人球蛋白試驗試劑及檢測結果信息。

8.收集弱D、部分D紅細胞，考察驗證抗D柱能否檢出，并明確上述RhD血型的具體確定方法。

9.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評價。

10.抗凝劑的適用性研究驗證。

（五）陽性判斷值的確定資料

提供充分的驗證試驗，體現(xiàn)不同凝集強度的結果，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報檢測卡的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實驗項目應至少包括外觀、靈敏度、特異性、重復性。

穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應符合《辦法》、2014年第44號公告和《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的規(guī)定，以下僅結合ABO、RhD血型抗原檢測卡的具體特點對其臨床試驗中應重點關注的內(nèi)容進行闡述。

1.研究方法

按照法規(guī)要求應選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質量較好的同類產(chǎn)品或試管法作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明考核試劑與已上市產(chǎn)品或試管法等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應選擇符合法規(guī)要求資質的臨床試驗機構進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應不少于3000例。應采用臨床患者進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應包括血型鑒定易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。血型分布盡量均衡，ABO血型每種均應有統(tǒng)計學意義，RhD陰性樣本建議不少于50例。

4.實驗過程

分別采用考核試劑與對比試劑依據(jù)各自的說明書對入組臨床樣本進行血型檢測，記錄結果應具體到凝集強度。

5.統(tǒng)計學分析

應分別進行考核試劑與對比試劑對不同ABO血型、RhD血型的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，對定性結果進行Kappa檢驗以驗證檢測結果的一致性。

6.結果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結果不一致（包括考核試劑與對比試劑定型結果不一致、考核試劑與對比試劑凝集強度差異較大，如≥2+）的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應結合樣本的復測結果進行綜合分析，最終應采用適合的方法進行樣本血型的最終確認。

如臨床樣本中包含凝集強度小于3+的樣本，應進行進一步確認，明確出現(xiàn)弱凝集的原因。

7.臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和血型定型結果，如有不符樣本應列明第三方確認的結果。

8.臨床試驗中應注意考核試劑與對比試劑應嚴格遵守說明書操作要求，如紅細胞懸液濃度、離心條件等，應與說明書一致。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

產(chǎn)品風險分析資料應符合2014年第44號公告的基本要求，并參照相應的行業(yè)標準進行風險分析。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行血型定型檢測時可能存在一定的干擾、抗體效價隨放置時間延長的減弱對結果的影響、樣本放置的影響等，申請人應根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應用可能存在的風險。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求。產(chǎn)品技術要求應符合《辦法》和2014年第44號公告的相關規(guī)定。

如果擬申報試劑已有相應的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則標準的要求不得低于上述標準要求。

產(chǎn)品技術要求的性能指標應至少包括外觀、靈敏度、特異性、重復性、穩(wěn)定性。

產(chǎn)品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應明確抗體來源、克隆號、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質量控制要求，緩沖液應明確組成、pH值等特性及質控要求；主要生產(chǎn)工藝應以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質量控制點；半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《辦法》要求，申請注冊的第三類體外診斷試劑應在具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、試驗原理、試驗方法、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內(nèi)容僅對ABO、RhD血型抗原檢測卡說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，說明書其他內(nèi)容應根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【預期用途】

1.1寫明本試劑用于人ABO血型的正定型檢測及RhD血型抗原的檢測，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法。

2.【儲存條件及有效期】

說明試劑的儲存條件及有效期。

3.【樣本要求】

明確紅細胞制備和濃度要求，明確配套紅細胞稀釋液，建議優(yōu)先使用生理鹽水，如使用配套稀釋液，應明確說明使用稀釋液替代生理鹽水的理由，詳細說明稀釋液成分并提供充分驗證資料。說明溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結果寫明樣本穩(wěn)定性要求，明確抗凝劑要求。

4.【適用儀器】寫明適用的離心機及自動化儀器（如適用）。

5.【陽性判斷值】

明確結果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。

6.【檢驗方法】

寫明具體方法及操作步驟。

明確質控要求：應根據(jù)相關規(guī)定進行每日質控試驗。

7.【檢驗方法的局限性】

7.1未完全去除纖維蛋白原的標本，可能因纖維蛋白阻礙紅細胞沉降而影響檢測結果，造成假陽性，建議洗滌后重新檢測。

7.2被檢標本染菌可能造成假陽性結果。

7.3實驗室溫度低可能導致凝膠顆?；顒有詼p少，單個紅細胞穿過困難，從而導致假陽性結果。

7.4使用陳舊樣本可能因細胞破碎，細胞膜浮于膠中或膠面呈弱陽性反應。

7.5對弱D等檢測情況進行說明。

7.6對檢測結果凝集強度小于3+的情況應如何進行后續(xù)處理進行詳細說明。

8.【注意事項】

8.1檢測卡在使用前應離心，并小心解開封口膜，避免迸濺。

8.2強調紅細胞懸液濃度范圍，不得過高或過低。

8.3微柱中出現(xiàn)溶血情況的處理。

8.4樣本離心時間和離心力應嚴格按照說明書要求操作。

8.5其他。

三、編寫單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術審評中心。