附件：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則（2018年第36號）.doc

抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。

本指導原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內(nèi)容，可自行補充。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、范圍

抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測等。

本指導原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。

本指導原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、有關產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從靈敏度、特異性、效價、重復性等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質(zhì)量標準的研究資料。

1.抗體的選擇及質(zhì)量標準

明確抗體的來源，如為單克隆抗體應明確細胞株、克隆號等內(nèi)容。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。

抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細生產(chǎn)及鑒定過程。

1.1靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種血型抗體（IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于1+。

1.2特異性：臨床有意義的已知血型系統(tǒng)至少7種，每種選1個抗體（IgG），與對應的抗原陽性細胞均應檢測陽性。

與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結(jié)果應為陰性。

1.3效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用IgG和/或C3d致敏的細胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進行驗證。

2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質(zhì)量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。

3.填充緩沖液：應說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

4.液體試劑稀釋液：應說明組成成分，并對外觀、性狀、pH值等物理指標及功能性進行研究驗證。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質(zhì)量控制的要求。

4.主要反應體系的研究資料、每一步反應體系的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。

反應體系的設置應符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認標準操作規(guī)范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅細胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉(zhuǎn)數(shù)和時間的方式設置離心條件。

（四）分析性能評估資料

申請人應提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內(nèi)或國際有關體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。

產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內(nèi)或境外已批準上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細胞、血型抗體等。

分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗方法應符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。

對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進行研究：

1.間接抗人球蛋白試驗：

提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少7種不規(guī)則抗體（IgG）檢測靈敏度和特異性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進行實驗。

1.1靈敏度

與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結(jié)果。

C3d凝集強度≥2+。

1.2特異性

與已知抗體類型的血型抗體對應的O型相應抗原陽性紅細胞的反應為陽性。

與已知抗體類型的血型抗體對應的O型相應抗原陰性紅細胞的反應為陰性。

與C3d陽性或陰性樣本反應為陽性或陰性。

1.3重復性

分別采用IgG性質(zhì)抗D抗體，IgG性質(zhì)抗Jka/Jkb抗體，IgG性質(zhì)抗Fya/Fyb抗體進行重復性驗證。

批內(nèi)重復性采用同一批次檢測卡重復進行檢測，重復次數(shù)不少于10次。

日間重復性采用同一批次檢測卡每日重復進行檢測，重復天數(shù)不少于10天。

批間重復性采用至少三批檢測卡進行重復檢測。

批內(nèi)、日間、批間重復性檢測結(jié)果應基本一致，檢測結(jié)果凝集強度差異不超過1+。

采用陰性結(jié)果的血清重復10次檢測，均應出現(xiàn)陰性反應。

1.4干擾

提供溶血、脂血、黃疸干擾的評估資料，應至少采用強、中、弱性質(zhì)的抗體進行評價。

1.5血清、血漿比對的評估資料。

1.6抗凝劑的適用性研究驗證。

1.7采用部分臨床樣本進行檢測靈敏度和特異性的評價，應考慮涵蓋腫瘤、血液病、自身免疫病和貧血患者、老人及兒童等病例來源，應包括陽性和陰性病例。

1.8分別進行每個預期用途的完整的性能評估資料，應至少包括50例陽性病例。

2.直接抗人球蛋白試驗

使用被不規(guī)則抗體和/或C3d致敏的紅細胞進行反應，評價產(chǎn)品性能，適用的性能評價內(nèi)容可以參照間接抗人球蛋白試驗。

（五）陽性判斷值

給出不同凝集強度的研究方法，并明確不同凝集強度代表的具體意義，并應包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗方法、實驗步驟，提供不同凝集強度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、加熱穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實驗項目應至少包括靈敏度、特異性、重復性等內(nèi)容。

穩(wěn)定性研究資料應包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應對樣本穩(wěn)定性進行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應分別在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床試驗

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應符合《辦法》、“44號公告”及《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的規(guī)定，以下僅結(jié)合抗人球蛋白檢測試劑的具體特點對其臨床試驗中應重點關注的內(nèi)容進行闡述。

1.研究方法

該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗單位的選擇

應選擇符合相關法規(guī)要求的臨床試驗機構進行臨床試驗，不得選擇血站進行臨床試驗。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應不少于3000例。應采用臨床患者樣本進行臨床研究，供血者樣本不得作為臨床病例納入。應包括對檢測易產(chǎn)生干擾的病例，盡量選擇多種疾病患者樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者）、老人、兒童（不同年齡段）等。

4.實驗過程

無論直接抗人球蛋白試驗還是間接抗人球蛋白試驗，均應根據(jù)產(chǎn)品的預期用途和適用人群分別進行臨床試驗。

在進行間接抗人球蛋白檢測試劑臨床試驗的過程中除與對比試劑進行比較外，陽性結(jié)果應給出不規(guī)則抗體的具體鑒定結(jié)果。

產(chǎn)品如適用于不同的預期用途（如不規(guī)則抗體篩查、抗體致敏紅細胞檢測、交叉配血等），每種預期用途均應分別進行至少3000例的臨床試驗，如適用于不規(guī)則抗體篩查或抗體致敏紅細胞檢測等，每種預期用途應分別包含不少于100例陽性病例，如適用于交叉配血相關用途，應包含不少于100例交叉配血不合病例。抗體致敏紅細胞檢測應根據(jù)疾病的種類，分別進行臨床試驗。

交叉配血使用的供血者樣本，最多只能使用兩次，交叉配血不得使用血型不合的樣本進行實驗。

同時應明確配合使用的試劑產(chǎn)品。

5.統(tǒng)計學分析

應進行考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計算，并以四格表的形式進行列表，并對定性結(jié)果進行Kappa檢驗以驗證檢測結(jié)果的一致性。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致[考核試劑與對比試劑檢測結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強度差異較大（差異2個凝集強度及以上）]的樣本，應采用臨床上公認較好的第三種同類試劑進行確認試驗，同時應給出最終的抗體鑒定結(jié)果。

7.臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應作為臨床試驗報告附件提交。臨床試驗數(shù)據(jù)記錄表應列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強度和抗體鑒定結(jié)果，如有不符樣本應列明第三方確認的結(jié)果。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

產(chǎn)品風險分析資料應符合“44號公告”的基本要求，并參照相應的行業(yè)標準進行風險分析。風險分析中應充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進行抗人球蛋白檢測時可能存在一定的干擾、實驗過程不規(guī)范、有些抗體較弱導致的檢測結(jié)果不穩(wěn)定等，申請人應根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應用可能存在的風險。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求。產(chǎn)品技術要求應符合《辦法》和“44號公告”的相關規(guī)定。

如果擬申報試劑已有相應的國家/行業(yè)標準發(fā)布，則企業(yè)標準的要求不得低于上述標準要求。

產(chǎn)品技術要求的性能指標應至少包括靈敏度、特異性、重復性等。

產(chǎn)品技術要求的附錄應包括主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定要求。主要原材料應明確抗體來源、克隆號、純度、效價、特異性以及功能性驗證要求，應明確填充物來源及主要特征、質(zhì)量控制要求，緩沖液應明確組成、pH值等特性及質(zhì)控要求。主要生產(chǎn)工藝應以流程圖形式描述主要生產(chǎn)工藝過程，并明確主要生產(chǎn)工藝的具體條件和質(zhì)量控制點。半成品檢定應明確半成品的檢驗要求及方法。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《辦法》要求，首次申請注冊的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認可的、具有相應承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構進行連續(xù)三個生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗原理、試驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應符合《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應與申請人提交的注冊申報資料中的相關研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明參考文獻的相關信息。

以下內(nèi)容僅對抗人球蛋白檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，說明書其他內(nèi)容應根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導原則》要求進行編寫。

1.【預期用途】

1.1寫明本試劑用于直接抗人球蛋白試驗和/或間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測（明確疾病類型）等，同時明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗。

1.2說明與預期用途相關的臨床適應癥背景情況，說明相關的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.【儲存條件及有效期】

說明試劑的儲存條件及有效期、加速穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等。

3.【適用儀器】明確具體的離心機和/或孵育器型號（如適用）。

4.【樣本要求】

明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。

明確適用的抗凝劑的要求。

明確具體的樣本采集、處理方法及過程。

明確紅細胞配制使用的LISS液的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

5.【陽性判斷值】

明確各種試驗方法的結(jié)果判斷方法及標準，并通過不同凝集強度的圖例或照片進行詳細解釋。

6.【檢驗方法】

明確配合使用的抗體篩查用紅細胞的生產(chǎn)廠家、規(guī)格、貨號等內(nèi)容。

須明確具體的檢驗步驟，反應體系的描述應準確且應與研究資料一致，不同的預期用途應分別詳細描述實驗過程。如配合其他試劑進行試驗，需注明試驗方法應完全符合配合試劑的試驗操作要求。

7.【檢驗方法的局限性】

未被檢出的抗IgG抗體在某些病例中可能有臨床意義。

8.【注意事項】

8.1上腔部分或封口處有氣泡或液滴的卡，必須在使用前離心。

8.2濃度過高或過低的紅細胞懸液會引起異常結(jié)果。

8.3在不規(guī)則抗體篩查、交叉配血試驗中LISS液可以增強抗原抗體的反應，應嚴格按產(chǎn)品說明書規(guī)范使用低離子液。

三、參考文獻

1.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）.2014年9月

2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導原則（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）.2014年9月

3.中國生物制品規(guī)程（2000年版）.化學工業(yè)出版社

四、起草單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術審評中心。